一种检测溶液或细胞中10~10M低浓度H2O2的方法

本发明一种检测溶液或细胞中10

1.一种检测溶液或细胞中10^-7~10^-5M低浓度H₂O₂的方法，其特征是以化合物(E)-2-(2,4-二羟基苯基)乙烯基-8-羟基喹啉为检测H₂O₂的荧光或比色探针试剂，简称探针，其结构如下：检测方法为：在乙腈/H₂Ov/v，3/2，pH11介质中（1）荧光光谱法检测H₂O₂，以415nm为激发波长，测定探针在580nm处的荧光强度降低随H₂O₂浓度变化，用校正曲线法检测；（2）紫外吸收光谱法检测H₂O₂，测定探针在410nm处的吸光度降低随H₂O₂浓度变化，用校正曲线法检测；（3）利用探针的颜色变化目视检测H₂O₂：日光下探针溶液颜色随H₂O₂的加入由橙红色变为无色；在365nm紫外灯下探针溶液发射荧光颜色随H₂O₂的加入由橙红色变为无色；（4）在活细胞内利用H₂O₂使探针的荧光猝灭，用荧光成像可视检测细胞内H₂O₂。
2.根据权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10^-7~10^-5M低浓度H₂O₂的方法，其特征是在浓度为10μM探针的乙腈/H₂Ov/v，3/2，pH=11溶液中，用荧光或紫外-可见吸收法检测H₂O₂，检测时反应时间控制在20~30min。
3.根据权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10^-7~10^-5M低浓度H₂O₂的方法，一种检测溶液和细胞中浓度低于10^-5MH₂O₂的方法，其特征是探针荧光和紫外-可见吸收法检测H₂O₂时，其它共存氧化剂或还原剂：NO₃^-，NO₂^-，t-BuOOH（过氧化氢叔丁醇），ClO^-，GSH（谷胱甘肽），O₂^-，t-BuO×（叔丁氧基自由基），×OH（羟基自由基）在浓度与H₂O₂相同时，不干扰探针对H₂O₂的测定。
4.按照权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10^-7~10^-5M低浓度H₂O₂的方法，其特征是探针用荧光法检测H₂O₂的浓度线性范围为8.3×10^-7~4.3×10^-5M，检测限为2.3×10^-8M；紫外-可见吸收法检测H₂O₂的浓度线性范围为8.5×10^-7~5.2×10^-5M，检测限为8.9×10^-7M。
5.按照权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10^-7~10^-5M低浓度H₂O₂的方法，其特征是所述探针的荧光成像检测活性细胞内H₂O₂方法为：活性PC3细胞经复苏、传代、接种、培养、清洗后，将细胞浸入pH值为11的含10mM探针的培养液，在37℃，5%CO₂以及饱和湿度为100%的培养箱中孵育1h，吸出含探针的培养液，用新鲜培养基清洗细胞，用荧光显微镜检测，呈现清晰的红色荧光细胞图像；再将上述细胞浸入含20mMH₂O₂的培养液中孵化10min后，吸出含H₂O₂的培养液，用新鲜培养基清洗细胞3次，用荧光显微镜检测，观察到微弱的红色荧光细胞图像；再经H₂O₂孵化30min后，用荧光显微镜检测，观察不到细胞的荧光图像。
6.根据权利要求1-5之一所述的一种检测溶液或细胞中10^-7~10^-5M低浓度H₂O₂的方法，其特征是所用的试剂为分析纯或生化试剂，所用水为二次蒸馏水或生理盐水；所用活性PC3细胞为人体前列腺癌细胞；所用的拍照设备为荧光倒置显微镜。