杯方烃荧光探针应用于活细胞中Zn2+、 F-荧光成像的方法

本发明建立了一种杯芳烃荧光探针应用于活细胞中Zn

1.杯芳烃荧光探针应用于活细胞中Zn²⁺、F^-成像的方法，其特征是以1,3-交替-5,11,17,23-四叔丁基-25,27-二[(7-羟基-8-香豆素亚氨基)乙氧基]-26,28-硫杂杯[4]冠-5，简称探针2，化学结构式为： 作为细胞内微量Zn²⁺、F^-的荧光成像探针，探针与活细胞相容，能渗透到细胞内，通过探针2对细胞内Zn²⁺或F^-染色后，用荧光倒置显微镜检测出清晰的蓝色荧光细胞图像，探针2是活细胞中Zn²⁺、F^-的荧光成像试剂。
2.根据权利要求1所述的杯芳烃荧光探针应用于活细胞中Zn²⁺、F^-成像的方法，其特征是用探针2对细胞内Zn²⁺进行染色和成像的具体方法为：(1)活细胞培养：PC3活细胞经复苏接种于含10％胎牛血清和含1％双抗的RPMI 1640培养基中，HeLa活细胞经复苏接种于含10％胎牛血清和含1％双抗的高糖DMEM培养基中，在37℃，5％CO₂及饱和湿度为100％的培养箱中培养、传代，接种于12孔板中，密度约为2×10⁴个/ml；(2)探针对细胞染色：将步骤(1)细胞浸入10μmol·L^-1探针2的混合溶液中，混合溶液由按体积配制的90％培养基，9％H₂O和1％THF组成，培养箱中孵育30min，用新鲜培养基清洗细胞，荧光显微镜下明场和暗场拍照；(3) 细胞内探针对Zn²⁺染色：将上述步骤(2)中经探针2染色后的细胞再浸入含10μmol·L^-1Zn²⁺的培养基溶液，培养箱中孵育30min，用新鲜培养基清洗细胞，荧光显微镜下暗场拍照，细胞影像拍照获得清晰的细胞轮廓影像。
3.根据权利要求1所述的杯芳烃荧光探针应用于活细胞中Zn²⁺、F^-成像的方法，其特征是用探针2对细胞内F^-进行染色和成像的具体方法为(1)活细胞培养：PC3活细胞经复苏接种于含10％胎牛血清和含1％双抗的RPMI 1640培养基中，HeLa活细胞经复苏接种于含10％胎牛血清和含1％双抗的高糖DMEM培养基中，在37℃，5％CO₂及饱和湿度为100％的培养箱中培养、传代，接种于12孔板中，密度约为2×10⁴个/ml；(2)探针对细胞染色：将步骤(1)细胞浸入10μmol·L^-1探针2的混合溶液中，混合溶液由按体积配制的90％培养基，9％H₂O和1％THF组成，培养箱中孵育30min，用新鲜培养基清洗细胞，荧光显微镜下明场和暗场拍照；(3)细胞内探针对F^-染色：将上述步骤(2)中经探针2染色后的细胞再浸入含50μmol·L^-1F^-的培养基溶液，培养箱中孵育60min，用新鲜培养基清洗细胞，荧光显微镜下暗场拍照。
4.按照权利要求1、2或3所述的杯芳烃荧光探针应用于活细胞中Zn²⁺、F^-成像的方法，其特征是在对细胞染色成像中，探针2以及Zn²⁺、F^-都能渗透到活细胞内，细胞呈圆滑饱满状，与细胞具有良好的相容性，在24小时内未见细胞凋亡，对细胞无毒性；探针与细胞染色后荧光显微镜不能拍到细胞的荧光影像；而经探针染色后再分别与Zn²⁺或F^-离子二次染色后，荧光显微镜检测到清晰的蓝色荧光细胞分布，拍到清晰的细胞轮廓荧光影像。
5.按照权利要求2、3之一所述的杯芳烃荧光探针应用于活细胞中Zn²⁺、F^-成像的方法，其特征是所用的细胞是：PC3细胞为人体前列腺癌细胞，HeLa细胞为人体子宫颈癌细胞；试剂为分析试剂、生化试剂，水为二次蒸馏水或生理盐水；拍照设备为荧光倒置相差显微镜，在激发波长范围为330～385nm的蓝色通道激发下，观察到细胞呈现清晰的蓝色荧光影像。