含1,3,4‑噁二唑基的双酰胺类化合物及其制备方法及应用

本发明涉及药物化学技术领域，尤其是一种含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物及其制备方法与应用。

技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，尤其是一种含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
近年来，随着生态条件、品种和耕作制度的不断改变，植物细菌性病害(如水稻白叶枯病和柑橘溃疡病等)和病毒病(如烟草花叶病等)在我国大规模发生并流行，并在全国有进一步扩散蔓延趋势，为害范围广，防治困难，现有商品化抗菌药剂(如叶枯唑、噻菌铜、可杀得等)及抗病毒剂(宁南霉素、病毒唑等)防效低，急需发现高效抗植病细菌或病毒的活性化合物，在此基础上创制出自主知识产权的绿色新农药，为农作物细菌性和病毒性病害防控提供候选药物。双酰胺类化合物因在抗细菌和病毒方面具有广泛的生物活性而成为研究学者研究的热点之一，商品化的双酰胺类化合物有杀虫剂(如氯虫酰胺(chlorantraniliprole)、氟虫酰胺(flubendiamide)等)、杀菌剂(如苯吡菌酮(fenpyrazamine)等)。同时，含1,3,4-噁二唑基团的硫醚类化合物在农药方面也表现出广泛的生物活性。为了寻找高效杀菌、抗病毒的活性化合物，本发明以双酰胺类化合物为基础，将可能提高目标化合物生物活性的1,3,4-噁二唑基团引入到此体系中，合成一系列含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物，考察其生物活性，为新农药的研发和创制提供重要的科学基础。双酰胺类化合物的生物活性研究进展如下：2013年Wu等[Wu,J.；Kang,S.H.；Luo,L.J.；Shi,Q.C.；Ma,J.；Yin,J.；Song,B.A.；Hu,D.Y.；Yang,S.Synthesis and antifungal activities of novel nicotinamide derivatives containing 1,3,4-oxadiazole.Chem.Cent.J.2013,7,64]合成了一系列的含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类衍生物。此类化合物对小麦赤霉病菌、辣椒枯萎病菌及苹果腐烂病菌表现出一定的抑制活性。2016年Yang等[Z.B.Yang,D.Y.Hu,S.Zeng,B.A.Song,Novel hydrazone derivatives containing pyridine amide moiety:Design,synthesis,and insecticidal activity.Bioorg.Med.Chem.Lett.2016,26,1161-1164]合成了一系列含酰腙结构的双酰胺类化合物，生物活性测试结果表明目标化合物对稻褐飞虱、小菜蛾及尖音库蚊具有杀虫活性，其中，化合物5j对尖音库蚊表现出最强的杀虫活性，其LC₅₀和LC₉₅分别为2.44和5.76mg/L。2016年Good等[J.A.Good,J.Silver,C.-Otero,W.Bahnan,K.S.Krishnan,O.Salin,P.R.Svensson,P.Artursson,Gylfe,S.F.Almqvist,Thiazolino 2-Pyridone Amide Inhibitors of Chlamydia trachomatis Infectivity.J.Med.Chem.2016,59,2094-2108]报道了一系列噻唑并2-吡啶酮酰胺类化合物，生物活性测试结果表明，部分目标化合物对沙眼衣原体表现出了较好的抑制活性。含1,3,4-噁二唑基团衍生物的生物活性研究进展如下：2013年，Xu等[W.M.Xu,S.Z.Li,M.He,S.Yang,X.Y.Li,P.Li.Synthesis and bioactivities of novel thioether/sulfone derivatives containing 1,2,3-thiadiazole and1,3,4-oxadiazole/thiadiazole moiety.Bioorg.Med.Chem.Lett.,2013,23,5821-5824]设计合成了含1,3,4-噁二唑基团的硫醚、砜类化合物。初步的抗病毒生物活性测试表明，在500μg/mL的浓度下，此类化合物对烟草花叶病毒表现出较好的抑制活性，其中化合物7a、7c、7d、8a和9a表现出了较高的抑制活性。2015年，Wu等[W.N.Wu,Q.Chen,A.Q.Tai,G.Q.Jiang,G.P.Ouyang,Synthesis and antiviral activity of 2-substituted methylthio-5-(4-amino-2-methylpyrimidin-5-yl)-1,3,4-oxadiazole derivatives.Bioorg.Med.Chem.Lett.2015,25,2243-2246]合成了一系列嘧啶联1,3,4-噁二唑类化合物。抗病毒活性测试表明，目标化合物对烟草花叶病毒具有较好的抑制活性，其中，化合物8i对烟草花叶病表现出较高的治疗活性，其EC₅₀为246.48μg/mL。2016年，Khalilullah等[H.Khalilullah,S.Khan,M.S.Nomani,B.Ahmed,Arab.J.Chem.2016,9,S1029-S1035]报道了一些列含1,3,4-噁二唑基团的苯并二氧六环类衍生物。生物活性测试表明，部分目标化合物对细菌(如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等)和真菌(黑曲霉、黄曲霉、白色念珠菌等)表现出较好的抑制活性。
发明内容
本发明的目的是：提供一种含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物及其制备方法及应用，它对致病病原细菌和病毒具有良好的抑制效果，且其合成方法经济简便。本发明是这样实现的：一种含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物，该化合物具有如通式(Ⅰ)所示的结构：                      式中，R₁为氢、C_1-4烷基、三氟甲基、C_1-3烷氧基、三氟甲氧基、丙烯基、丙烯酰胺基、C_1-3烷氨基、硝基或卤素原子；R₂为氢、C_1-4烷基或不同取代苄基，其中，不同取代的苄基上的取代基为一个以上，取代基为氢、C_1-4烷基、三氟甲基、C_1-3烷氧基、三氟甲氧基、丙烯基、丙烯酰胺基、C_1-3烷氨基、硝基或卤素原子；R₃为C_1-4烷基、三氟甲基或不同取代苯基，其中，不同取代的苯基上的取代基为一个以上，取代基为氢、C_1-4烷基、三氟甲基、羟基、C_1-3烷氧基、三氟甲氧基、丙烯基、丙烯酰胺基、氨基、C_1-3烷氨基、硝基或卤素原子；X为氧原子或硫原子。含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物的制备方法，其合成路线如下；                      式中，R₁为氢、C_1-4烷基、三氟甲基、C_1-3烷氧基、三氟甲氧基、丙烯基、丙烯酰胺基、C_1-3烷氨基、硝基或卤素原子；R₂为氢、C_1-4烷基或不同取代苄基，其中，不同取代的苄基上的取代基为一个以上，取代基为氢、C_1-4烷基、三氟甲基、C_1-3烷氧基、三氟甲氧基、丙烯基、丙烯酰胺基、C_1-3烷氨基、硝基或卤素原子；R₃为C₁-₄烷基、三氟甲基或不同取代苯基，其中，不同取代的苯基上的取代基为一个以上，取代基为氢、C_1-4烷基、三氟甲基、羟基、C_1-3烷氧基、三氟甲氧基、丙烯基、丙烯酰胺基、氨基、C_1-3烷氨基、硝基或卤素原子；X为氧原子或硫原子。含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物在制备抗致病病原细菌和病毒的药物中的应用。通过采用上述技术方案，本发明以芳基双酰胺类化合物为基础，将能够提高目标化合物生物活性的1,3,4-噁二唑基引入到此体系中，合成一系列含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物，且发现该化合物对致病病原细菌和病毒具有良好的抑制作用，针对病原细菌[如水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)、柑橘溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri,Xac)等]和植物病毒[如烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)等]均具有良好的抑制效果，为新农药的研发和创制提供重要的科学基础。
具体实施方式
本发明的实施例1：目标化合物2-乙酰氨基-N-(2-甲基-5-(甲硫醚基)-1,3,4-噁二唑)苯甲酰胺的制备将乙酰氯(0.09g,1.14mmol)加入到溶有2-氨基-N-(2-甲基-5-(甲硫醚基)-1,3,4-噁二唑)苯甲酰胺(0.20g,0.76mmol)和三乙胺(0.2mL)的8mL干燥四氢呋喃溶液中，常温反应12小时后停止反应，脱溶，加入50mL乙酸乙酯，水洗20mL×3次，无水硫酸钠干燥，脱溶，柱层析(洗脱剂CH₂Cl₂:CH₃OH＝20:1)得白色固体，产率11.4％，熔点143-144℃。其它目标化合物的合成参照实施例1。合成的部分含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物的结构及核磁共振氢谱和碳谱数据如表1所示，物化性质如表2所示。表1部分化合物的核磁共振氢谱和碳谱数据                              表2部分目标化合物的理化性质                              药理实施例1：采用浊度法测试目标化合物对植物病原菌的抑制率，试验对象为水稻白叶枯病菌(Xoo)和柑橘溃疡病菌(Xac)。DMSO溶解在培养基中作为空白对照。将水稻白叶枯病菌(水稻白叶枯病原菌在M210固体培养基)放到NB培养基中，在28℃、180rpm恒温摇床中振荡培养到对数生长期备用；将柑橘溃疡病菌(在M210固体培养基上)放到NB培养基中，在28℃、180rpm恒温摇床中振荡培养到对数生长期备用。将药剂(化合物)配置成不同浓度(例：100,50μg/mL)的含毒NB液体培养基5mL加入到试管中，分别加入40μL含有植病细菌的NB液体培养基，在28-30℃、180rpm恒温摇床中振荡，其水稻白叶枯病原菌培养36h，柑橘溃疡病菌培养48h。将各个浓度的菌液在分光光度计上测定OD₅₉₅值，并且另外测定对应浓度的含毒无菌NB液体培养基的OD₅₉₅值。校正OD值＝含菌培养基OD值－无菌培养基OD值抑制率％＝[(校正后对照培养基菌液OD值－校正含毒培养基OD值)/校正后对照培养基菌液OD值]×100本发明实施例辅以说明本发明的技术方案，但实施例的内容并不局限于此，部分目标化合物实验结果如表3所示。表3含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物对植物病原细菌的抑制活性                              “NT”表示未测试从表3中可以看出，在离体试验中，目标化合物对植物致病病原菌(如水稻白叶枯病菌和柑橘溃疡病菌)表现出了较好的抑制活性。其中，化合物3和4在100μg/mL浓度下对水稻白叶枯病菌的抑制活性分别为68.3和61.2％；化合物2在100μg/mL浓度下对柑橘溃疡病菌的抑制率为98.0％，可用于制备抗植物致病病原细菌农药。药理实施例2：部分目标化合物的抗病毒活性实验(抗烟草花叶病毒)采用半叶斑法测定化合物的抗植物病毒活性。准确称取3mg供试化合物于称量瓶中，加入溶剂DMSO 60μL使其充分溶解。用含1％Tween 20的二次蒸馏水将其配成500mg/L的化合物溶液。另取250μL 2％宁南霉素水剂，加入溶剂DMSO 60μL，含1％Tween 20的二次蒸馏水10mL，配成500mg/L的宁南霉素溶液。药剂对TMV侵染的活体治疗活性。选取长势一致的心叶烟，先用排比蘸取病毒液(浓度为6×10^-3mg/mL)，在叶面(全叶)沿其支脉方向人工摩擦接种于撒有金刚砂的叶片上，左右叶片的接种力度尽量保持一致，叶片下方用平整木板支撑。待病毒液干后，用流水冲洗掉叶片上面的金刚砂。待叶片干后，在左半叶涂施药剂，右半叶涂施灭菌水作对照。每药剂处理设3株，每株3-4片叶，随后将植株放在光照培养箱中保湿培养，控制温度23℃，光照10000LuX，2-4d后观察并记录产生枯斑的数目。按上述方法每药剂进行3次重复，计算抑制率。药剂对TMV侵染的活体保护活性。选取长势一致的心叶烟，用毛笔轻轻在左半叶涂施药剂，右半叶涂施灭菌水作对照，24小时后接种病毒。用排笔蘸取病毒汁液(浓度为6x10^-3mg/mL)，在叶面(全叶)沿其支脉方向人工摩擦接种于撒有金刚砂的叶片上，左右叶片的接种力度尽量保持一致，叶片下方用平整木板支撑。待病毒液干后，用流水冲洗掉叶片上面的金刚砂。每药剂处理设3株，每株3-4片叶，随后将植株放在光照培养箱中保湿培养，控制温度23℃，光照10000Lux，2-4d后观察并记录产生枯斑的数目。按上述方法每药剂进行3次重复，计算抑制率Y(％)＝(R-L)/R×100％。其中：Y为化合物对对烟草花叶病毒的抑制率；R为对照组(右半叶)枯斑个数，L为处理组(左半叶)枯斑个数。本发明实施例辅以说明本发明的技术方案，但实施例的内容并不局限于此，实验结果如表4所示。表4含1,3,4-噁二唑基的双酰胺类化合物对植物病毒的抑制活性                              从表4可以看出，在浓度为500μg/mL下，活体测试结果表明，该系列化合物有一定的抗病毒活性，其中化合物2、3和4对抗烟草花叶病毒的治疗活性分别为47.2，49.3和44.8％；化合物1对抗烟草花叶病毒的保护活性为54.6％，可见本发明的化合物可用于制备抗植物病毒农药。