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制备高分子量透明质酸的方法及工程菌

制备高分子量透明质酸的方法及工程菌

  • 专利类型:发明专利
  • 有效期:不限
  • 发布日期:2020-03-30
  • 技术成熟度:详情咨询
交易价格: ¥面议
  • 法律状态核实
  • 签署交易协议
  • 代办官方过户
  • 交易成功

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  • 技术(专利)类型 发明专利
  • 申请号/专利号 CN201310737032.5 
  • 技术(专利)名称 制备高分子量透明质酸的方法及工程菌 
  • 项目单位 天津科技大学
  • 发明人 刘浩 
  • 行业类别 化学、冶金
  • 技术成熟度 详情咨询
  • 交易价格 ¥面议
  • 联系人 刘宇者
  • 发布时间 2020-03-30  
  • 01

    项目简介

    本发明涉及一种制备高分子量透明质酸的方法及工程菌,通过敲除兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)ATCC39920基因组中编码透明质酸裂解酶基因(hylb),本发明构建了透明质酸裂解酶基因(hylb)敲除载体pSET4s::hylb::cmr。本发明将敲除hylb基因的重组菌进行发酵分析,利用特性黏度法测定HA的分子量,得到分子量为3.9×10Da的HA。
    展开
  • 02

    说明书

    1.一种含有透明质酸裂解酶基因的载体,其特征在于:所述的载体将hylb
    基因内部1683bp基因片段插入初始载体pSET4s中,构建了中间载体
    pSET4s::hylb,再将一段包含氯霉素抗性基因cmr长度为1056bp的基因片段插入
    到hylb基因片段中的DraIII位点,形成载体pSET4s::hylb::cmr。
    2.根据权利要求1所述的含有透明质酸裂解酶基因的载体,其特征在于:所
    述hylb基因内部1683bp基因片段始于hylb基因起始密码子ATG下游202bp,结
    束于hylb基因终止密码子TAG上游1310bp,基因序列见序列1。
    3.根据权利要求1所述的含有透明质酸裂解酶基因的载体,其特征在于:
    所述一段包含氯霉素抗性基因cmr长度为1056bp的基因序列见序列2。
    4.一种将权利1要求所述载体pSET4s::hylb::cmr转入宿主菌,特异性敲除
    透明质酸裂解酶基因hylb,获得hylb基因功能缺失的工程菌。
    5.根据权利要求4所述的工程菌,其特征在于:所述工程菌的宿主菌为兽
    疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)ATCC39920。
    6.一种制备高分子量透明质酸的方法,其特征在于:使用权利要求4或5
    所述的工程菌发酵获得。
    7.根据权利要求6所述的制备高分子量透明质酸的方法,其特征在于:所
    述发酵获得透明质酸的分子量为3.9×106Da。
    8.根据权利要求6所述的制备高分子量透明质酸的方法,其特征在于:所
    述工程菌的发酵培养基:蔗糖50g/L,酵母提取物3.5g/L,酪蛋白胨10g/L,NaCl
    1.5g/L,K2HPO42g/L,MgSO4·7H2O0.4g/L。
    9.根据权利要求6、7、8之一所述的制备高分子量透明质酸的方法,其特
    征在于:所述工程菌的发酵条件:5L发酵罐,装液量3L,接种量8%,37℃,
    pH7.0,通气量3vvm,发酵20-30小时。
    展开

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