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一种磷脂酶A2突变体及其制备方法

一种磷脂酶A2突变体及其制备方法

  • 专利类型:发明专利
  • 有效期:不限
  • 发布日期:2020-03-30
  • 技术成熟度:详情咨询
交易价格: ¥面议
  • 法律状态核实
  • 签署交易协议
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  • 交易成功

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  • 技术(专利)类型 发明专利
  • 申请号/专利号 CN201410279966.3 
  • 技术(专利)名称 一种磷脂酶A2突变体及其制备方法 
  • 项目单位 天津科技大学
  • 发明人 路福平 
  • 行业类别 化学、冶金
  • 技术成熟度 详情咨询
  • 交易价格 ¥面议
  • 联系人 刘宇者
  • 发布时间 2020-03-30  
  • 01

    项目简介

    本发明涉及一种磷脂酶A突变体及其制备的方法,其技术方案是利用重组DNA技术定点突变来源于天蓝色链霉菌的野生型磷脂酶A的Glu37、Asp78的氨基酸残基,得到活力较高的磷脂酶A基因,然后将高活力磷脂酶A基因在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统(包括毕赤酵母游离表达系统和毕赤酵母细胞表面展示系统)中表达,得到产高活力磷脂酶A的重组菌株,表达后,检测高活力磷脂酶A的比酶活较野生型磷脂酶A提高13.7%,其中枯草芽孢杆菌高活力磷脂酶A重组菌发酵后磷脂酶A的酶活可达到53.5U/ml,毕赤酵母游离表达高活力磷脂酶A重组菌的酶活可达106.4U/ml,毕赤酵母细胞表面展示高活力磷脂酶A全细胞催化剂的酶活可达260U/(g·干细胞)。
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  • 02

    说明书

    1.一种磷脂酶A2突变体,其特征在于,其氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。
    2.权利要求1所述的磷脂酶A2突变体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
    (1)通过重叠PCR定点突变野生型磷脂酶A2基因,得到磷脂酶A2突变体编码基因;
    (2)将所述的磷脂酶A2突变体编码基因酶切、连接到表达或展示载体,得到携带磷脂酶
    A2突变体编码基因重组载体;
    (3)将重组载体转化至宿主细胞,得到重组菌株;
    (4)表达所述的重组菌株,纯化获得如SEQ ID NO:8所示的磷脂酶A2突变体。
    3.根据权利要求2所述的磷脂酶A2突变体的制备方法,其特征在于,所述野生型磷脂酶A2
    因来自天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)ATCC23899,其核苷酸序列如序列表SEQ ID 
    NO:9所示。
    4.权利要求1或2所述的磷脂酶A2突变体的编码基因如序列表SEQ ID NO:10所示。
    5.一种包含权利要求4所述的基因的克隆载体、表达载体、以及宿主细胞。
    6.根据权利要求5所述的克隆载体、表达载体或宿主细胞,其特征在于,所述的克隆载体为
    T载体、所述的表达载体为pBSA43、所述的宿主细胞为枯草芽孢杆菌WB600。
    7.权利要求5所述的克隆载体、表达载体或宿主细胞,其特征在于,所述的克隆载体为T
    载体、所述的表达载体为pPIC9K、所述的宿主细胞为毕赤酵母GS115。
    8.一种包含权利要求4所述的基因的克隆载体、展示载体、以及宿主细胞,其特征在于,
    所述的克隆载体为T载体、所述的展示载体为pPIC9K-Flo、所述的宿主细胞为毕赤酵母
    GS115。
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专利技术附图

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