一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法

本发明涉及一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法，该方法包括以下步骤：⑴原料预处理：将唐古特白刺的干燥果实去杂、水洗，得到处理后的白刺果实；⑵配制体积浓度为2%甲酸甲醇溶液；⑶将甲酸甲醇溶液加入到白刺果实中进行常温浸提，得到提取液；⑷提取液经过滤、蒸发浓缩，得到白刺花色苷浸膏；⑸大孔吸附树脂的处理；⑹将白刺花色苷浸膏复溶后上处理后的大孔吸附树脂，收集流出液；⑺流出液经减压浓缩后得到花色苷粗品；⑻将花色苷粗品注入高效半制备色谱柱中进行分离，即得纯度≥90%的花色苷单体；最后，花色苷单体经减压浓缩、干燥至恒重，即得花色苷单体成品。本发明分离效果好、耗时短、成本低。

1. 一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法，包括以下步骤：⑴原料预处理：将唐古特白刺的干燥果实挑选去杂，用水冲洗，洗去表面浮土，得到处理后的白刺果实；⑵配制体积浓度为2%甲酸甲醇溶液：将200 mL甲酸与9800 mL甲醇混合均匀即得；⑶将所述步骤⑵所得的甲酸甲醇溶液加入到所述白刺果实中，在室温避光状态下按1 g：1 ~5mL的比例进行常温浸提，提取次数为1~3次，每次12~24 h，合并得到提取液；⑷所述提取液用滤纸除去不溶物、蛋白质、多糖后，得到滤液，该滤液于旋转蒸发仪上在40~50℃进行真空蒸发浓缩至膏状，得到白刺花色苷浸膏，并回收甲醇；⑸大孔吸附树脂的处理：将D-101大孔吸附树脂用体积浓度为95% 的甲醇浸泡 24 小时，然后用体积浓度为95% 的甲醇进行洗涤，再用去离子水清洗；将该大孔吸附树脂缓慢装入树脂柱中，再用去离子水冲洗至柱中颗粒干净，不再沉降为止，即得处理后的大孔吸附树脂；⑹将所述白刺花色苷浸膏用体积浓度为2 %的甲酸复溶后上所述处理后的大孔吸附树脂；上样后先以4~6倍柱体积的蒸馏水冲柱，然后再以3~6倍柱体积的甲醇冲柱，将花色苷类化合物解吸附，收集流出液；⑺所述流出液经减压浓缩后得到花色苷粗品，同时回收甲醇；⑻将所述花色苷粗品注入高效半制备色谱柱中，在柱温为25~40℃、流速为15~25 mL/min、进样量为200~600 mg、检测波长为525nm的条件下进行半制备色谱分离，根据出峰时间依次收集单体矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和芍药素-3-O-葡萄糖苷；然后采用高效液相色谱系统在柱温为25~40℃、流速为0.6~1.0 mL/min、进样量为10 ul、检测波长为525nm的条件下进行检测，当样品纯度低于90%时，再次采用高效半制备色谱柱进行二次分离，即得纯度≥90%的花色苷单体；最后，所述花色苷单体于旋转蒸发仪上依次经减压浓缩、真空冷冻干燥至恒重，即得花色苷单体成品。
2.如权利要求1所述的一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法，其特征在于：所述步骤⑺和步骤⑻中减压浓缩的条件均是指40~50℃水浴，转速45~55 r.p.m，真空泵压力为0.06~0.08MPa。
3.如权利要求1所述的一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法，其特征在于：所述步骤⑻中真空冷冻干燥的条件是指冷肼温度为-45~-55 ℃，真空度为10~15 Pa。
4.如权利要求1所述的一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法，其特征在于：所述步骤⑻中高效液相色谱分离的条件是指流动相分别为A相：A：体积浓度为10%的甲酸溶液中含有体积浓度为0.1%的三氟乙酸，B相：含有体积浓度为15%的甲醇的乙腈溶液；梯度洗脱程序为：0~20 min，3 % ~ 5 % B相，线性梯度；20~40 min，5 % B相，等度洗脱；40~55 min，5 % ~ 12 % B相，线性梯度；55~70 min，12 % ~ 22 % B相，线性梯度；70~100 min，22 % ~ 3 % B相，线性梯度。
5.如权利要求1所述的一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法，其特征在于：所述步骤⑻中半制备色谱分离的条件是指流动相分别为A相：含有体积浓度为50 %的乙腈的甲醇，B相：体积浓度为5 %甲酸的水溶液；一次纯化程序为：0~30 min，25%~40%A相，线性梯度；30~35 min，40%A相，等度洗脱；35~50 min，40%~43%A相，线性洗脱；50~70 min，43%~25%A相，线性洗脱；二次纯化程序为：流动相分别为A相：50 %甲醇水溶液，B相：5 %甲酸溶液，进行等度洗脱。