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一种提取植物DNA的方法及其专用试剂盒

一种提取植物DNA的方法及其专用试剂盒

  • 专利类型:发明专利
  • 有效期:不限
  • 发布日期:2021-07-15
  • 技术成熟度:详情咨询
交易价格: ¥面议
  • 法律状态核实
  • 签署交易协议
  • 代办官方过户
  • 交易成功

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  • 技术(专利)类型 发明专利
  • 申请号/专利号 CN201210124356.7 
  • 技术(专利)名称 一种提取植物DNA的方法及其专用试剂盒 
  • 项目单位 中国科学院植物研究所
  • 发明人 周世良;李金璐;于婧;王硕 
  • 行业类别 化学、冶金
  • 技术成熟度 详情咨询
  • 交易价格 ¥面议
  • 联系人 李志文
  • 发布时间 2021-07-15  
  • 01

    项目简介

    本发明的目的是提供一种被称为mCTAB的植物DNA提取方法及其专用试剂盒。本发明所提供的试剂盒包括缓冲液A,所述缓冲液A由溶质及溶剂组成;所述溶质及其在所述缓冲液A中的终浓度如下:乙二胺四乙酸二钠4-6mmol·L
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  • 02

    说明书


    1.一种用于提取植物DNA的试剂盒,其特征在于:试剂盒包括缓冲液A; 所述缓冲液A由溶质及溶剂组成;所述溶质及其在所述缓冲液A中的终浓度如下:乙二胺四乙酸二钠5mmol·L-1,NaCl0.25M,聚乙烯基吡咯烷酮2g/100ml;浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液10ml/100ml;所述溶剂为水; 所述试剂盒中还包括缓冲液B;所述缓冲液B由溶质及溶剂组成:所述溶质及其在所述缓冲液B中的终浓度如下:浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液10ml/100ml,乙二胺四乙酸二钠25mmol·L-1,NaCl1.4M,CTAB3g/100ml,偏亚硫酸氢钠1g/100ml,抗坏血酸钠1g/100ml,聚乙烯基吡咯烷酮2g/100ml,β-巯基乙醇100ul/100ml;所述溶剂为水。 
    2.一种提取植物DNA的方法,包括如下步骤: (1)将缓冲液A与植物组织粉末混匀,冰浴,离心,弃上清,收集沉淀; (2)将缓冲液B与步骤(1)所得沉淀混匀,放置,离心,收集上清液;所述放置的方法为60℃-70℃水浴90-120min; (3)用氯仿异戊醇溶液从步骤(2)中所得上清液中提取DNA,再进行去RNA及沉淀DNA的步骤,得到目的DNA; 所述缓冲液A和所述缓冲液B均为权利要求1所述试剂盒中的缓冲液A和缓冲液B。 
    3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:所述步骤(1)中,冰浴的时间为10min-20min。 
    4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:所述步骤(2)中,所述放置的方法为65℃水浴100min。 
    5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述方法中,在所述步骤(1)之后,所述步骤(2)之前,还包括如下重复步骤:将上一步骤所得沉淀与所述缓冲液A混匀,冰浴,离心,弃上清,收集沉淀;直到上清不粘稠。 
    6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于: 所述步骤(1)中,所述缓冲液A与植物组织粉末的配比为1mL缓冲液A:20mg植物组织粉末;所述冰浴过程中颠倒混匀2-3次;所述离心为7000×g离心10min;所述冰浴的时间为15min; 所述步骤(2)中,所述缓冲液B与所述植物组织粉末的配比为0.7mL缓冲液B:20mg植物组织粉末;所述水浴过程中颠倒混匀数次;所述离心为10000×g离心10min; 所述步骤(3)中,所述用氯仿异戊醇溶液从步骤(2)中所得上清液中提取DNA的方法如下:向步骤(2)所得上清液中加入0.7mL氯仿异戊醇溶液,颠倒混匀10min, 10000×g,离心10min,收集上清;氯仿异戊醇溶液中氯仿:异戊醇的体积比为24:1;重复上述氯仿异戊醇提取DNA的步骤,直到离心后两个液面之间没有沉淀;然后加入0.5mL异丙醇,混匀,-20℃放置20min,10000×g,离心10min,弃上清; 所述步骤(3)中,所述去RNA的方法包括如下步骤:加入0.1mL的浓度为100mg·L-1的RNase溶液,37℃放置30-60min;加入0.1mL去离子水、0.1mL5M NaCl溶液,0.8mL95%无水乙醇,混匀,10000×g离心10min,弃上清; 所述步骤(3)中,所述沉淀DNA的方法如下:加入0.5mL75﹪乙醇水溶液,弹起沉淀,10000×g,离心2min,弃上清。 
    7.根据权利要求2-6中任一所述的方法,其特征在于:所述植物组织为植物叶片。 
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